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細(xì)胞“罷工”?!細(xì)胞傳代后增殖緩慢之謎!

更新時間:2024-11-25瀏覽:645次

培養(yǎng)箱里,我們的“小勞模"細(xì)胞們每天忙著分裂增殖,為我們的實(shí)驗(yàn)貢獻(xiàn)著力量。然而,有時候,這些小家伙們卻會突然“罷工",傳代后的增殖速度變得慢如蝸牛,仿佛一夜之間愛上了慢生活。這背后究竟是什么原因呢?怎樣才能讓細(xì)胞們恢復(fù)干勁呢? 請看下文:

接種密度低

你知道嗎?很多細(xì)胞都有密度依賴。細(xì)胞自身會分泌一些因子到培養(yǎng)基中促進(jìn)周圍的細(xì)胞生長(旁分泌)。細(xì)胞密度太低,這種化學(xué)信號的傳遞減弱,細(xì)胞狀態(tài)受到影響。接種密度越低,增殖越慢,甚至不增殖。

細(xì)胞“罷工

解決方案:根據(jù)細(xì)胞生長速度確定合適的傳代比例和接種密度。如果細(xì)胞已經(jīng)傳稀了,可以耐心繼續(xù)培養(yǎng),或?qū)⒓?xì)胞重新傳到更小的器皿中,增加密度。特別提醒!T25培養(yǎng)瓶底面積為25cm2,10cm培養(yǎng)皿底面積是55cm2,所以一個T25傳10cm皿約等于1:4傳代,而不是1:2


培養(yǎng)基、血清不合適

想象一下,你突然到一個全新的城市上學(xué)上班,面對全新的環(huán)境,是不是也需要適應(yīng)一段時間呢?細(xì)胞突然被換到新的培養(yǎng)基和血清中,也會出現(xiàn)水土不服的情況,特別是對血清要求高的細(xì)胞。新的培養(yǎng)基或血清不對細(xì)胞胃口時,導(dǎo)致它們食欲不振",生長速度自然就慢了下來。

細(xì)胞“罷工

解決方案

檢查新培養(yǎng)基和原培養(yǎng)基的配方是否有差異,是否需要額外添加試劑,成分盡量保持一致。新培養(yǎng)基和原培養(yǎng)基混合培養(yǎng)1-2代,讓細(xì)胞慢慢適應(yīng),如果細(xì)胞正常生長,再完quan替換為新的培養(yǎng)基。如果它們實(shí)在適應(yīng)不了新培養(yǎng)基,還是換回原培養(yǎng)基,畢竟實(shí)驗(yàn)不等人??!另外,記得定期換液,別等培養(yǎng)基都變成金黃色了才換,這無異于把細(xì)胞活活餓死!



細(xì)胞受損

在細(xì)胞傳代的過程中,如果發(fā)生一些“工傷"事故比如胰酶消化時間過長,導(dǎo)致它們受傷;消化時間過短,細(xì)胞們還沒完quan分開,就被強(qiáng)行“搬家"了,導(dǎo)致細(xì)胞膜受損;重懸時瘋kuang吹打,生怕吹不均勻,結(jié)果把細(xì)胞打得半死不活,都會導(dǎo)致細(xì)胞增殖速度變慢。

細(xì)胞“罷工

解決方案:

傳代時嚴(yán)格控制胰酶消化時間,控制吹打次數(shù)和力道。如果細(xì)胞已經(jīng)受損了,傳代后漂浮細(xì)胞和碎片很多,可以嘗試提高血清濃度(總量不超過20%),幫助它們恢復(fù)元?dú)狻?/span>如果傷情嚴(yán)重,搶救失敗,那還是重新復(fù)蘇吧!

細(xì)胞衰老

原代細(xì)胞以及一些有限傳代的細(xì)胞系,隨著傳代次數(shù)增多,細(xì)胞生長速度逐漸減慢,最終停止增殖。

細(xì)胞“罷工


解決方案:

細(xì)胞衰老是自然法則無法避免,我們可以通過優(yōu)化培養(yǎng)條件和操作,讓細(xì)胞盡可能保持好的狀態(tài),并及時進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對于有限細(xì)胞系,要記得凍存早期代次作為備份。對于原代細(xì)胞,則要規(guī)范提取步驟,保證細(xì)胞質(zhì)量穩(wěn)定,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性才能更好。

雖然細(xì)胞不增殖的時候我們心急如焚,但也讓我們更加深入了解自己細(xì)胞的特性。通過不斷探索和實(shí)踐,當(dāng)我們找到了z適合的培養(yǎng)方案,細(xì)胞們會更加健康、快樂地生長著。祝各位同學(xué)和自己的細(xì)胞們相處愉快!



 

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